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实验室的故事之金黄色葡萄球菌
作者:蒋晓玲 马艳琳 姚武
文 / 蒋晓玲 马艳琳 姚武
边民互市贸易是指边境地区边民在我国陆路边境20公里以内,经政府批准的开放点或指定的集市上,在不超过规定的金额或数量范围内进行的商品交换活动。目前,我国在内蒙古、新疆、西藏、广西、云南、黑龙江、吉林、辽宁8个陆路边境省份及自治区存在边民互市贸易,由呼和浩特、满洲里、乌鲁木齐、拉萨、南宁、昆明、哈尔滨、长春、大连9个直属海关负责辖区内边民互市贸易的海关行政执法工作。边民通过互市贸易进口的商品仅限生活用品,包括饼干、糖果、饮料、地毯等。海关接受申报并对边民申报内容进行审核,有查验指令的,海关工作人员根据指令进行查验采样送检。以饼干为例,其送检项目为色泽、气味、酸价、过氧化值、菌落总数、大肠菌群、霉菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等。本文主要介绍饼干中金黄色葡萄球菌的检测。
金黄色葡萄球菌初探
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S. aureus)属于葡萄球菌属,是一种人类重要的病原菌,可引起许多严重污染。金黄色葡萄球菌也称“金葡菌”,典型的金黄色葡萄球菌为球形,直径为0.8μm左右,显微镜下排列呈葡萄串状,是革兰氏阳性菌的代表。该菌最适宜生长温度为37℃,pH值为7.4,耐高盐,可在盐浓度接近10%的环境中生长。金黄色葡萄球菌常寄生于人和动物的皮肤、鼻腔、咽喉、肠胃、痈、化脓疮口中,空气、污水等环境中也无处不在。金黄色葡萄球菌在适当的条件下,能够产生肠毒素,引起食物中毒。近几年,金黄色葡萄球菌引发的食物中毒报道层出不穷,其引起的食物中毒事件占食源性微生物食物中毒事件的25%左右,也使其成为仅次于沙门氏菌和副溶血杆菌的第三大微生物致病菌。
金黄色葡萄球菌的实验室检测流程
目前,世界各国对食品中金黄色葡萄球菌的检测通常采用生化鉴定手段,并在初期采用平板画线分离。我国检测食品中金黄色葡萄球菌依据国家标准《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10)方法进行。
第一步
在无菌室中称取25g饼干置于盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/分~10000r/分均质1~2分钟;或置于盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1~2分钟,制成 1∶10的样品匀液。
第二步
根据对样品污染状况的估计,选择2~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液)。在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液,以0.3mL、 0.3mL、0.4mL的接种量分别加入3块Baird-Parker平板,然后用无菌涂布棒涂布整个平板。
第三步
涂布后,将平板静置10分钟,如果样液不易吸收,可将平板放在培养箱(36℃±1℃环境下)培养1小时,待样品匀液吸收后翻转平板,倒置后培养24~48小时。
第四步
选择典型的金黄色葡萄球菌菌落平板(同一稀释度下3个平板菌落数合计在20CFU~200CFU),计数典型菌落数。
第五步
从典型菌落中至少选5个可疑菌落(小于5个则全选)进行鉴定试验。分别做染色镜检和血浆凝固酶试验;同时,画线接种到血平板36℃±1℃培养18~24小时后观察菌落形态,根据菌落数进行结果计算,并按照GB 29921-2013进行合格判定。
(作者单位:乌鲁木齐海关)
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